乳糜微粒

的介绍

乳糜微粒是人血浆中最大的脂蛋白颗粒，CM是多数膳食TG从小肠吸收部位输送至体循环。CM清除速度快，半衰期为10min，正常人空腹12h后不能检出，脂蛋白电泳时CM位于原点。需注意的是做血清脂蛋白电泳时样品应新鲜，不可冻存。

注意事项

1、免疫透射比浊法：

（1）关于抗血清：比浊测定与其他方法相比对抗血清的要求更高。比浊法以用多克隆抗体为宜。抗血清中必须不含杂抗体。

（2）上法中标本(血清)稀释200倍是为了便于手工操作(加样100μl)如有精密加样器可作20倍稀释(用10μl)。为了适合不同实验室的条件(如不同类型的自动化仪器)作适当修改时应注意抗原抗体的比例必须十分注意反应体系中不可有抗原过量线性上限不可低于2.5g/L。

（3）为了达到准确测定的目的apoA-Ⅰ与B比浊测定(终点法)中必须作校准曲线计算结果。

（4）主要干扰因素是血清本身的混浊(如高脂血清)用超离心或脂肪酶水解等标本预处理方法都不实用。

（5）有的商品试剂盒(包括某些进口产品)所附校准血清定值不准确是误差的重要来源。

2、火箭电泳法：

（1）抗原稀释倍数与抗血清用量的选择应以火箭峰清晰、校准曲线斜率适中并成直线为宜。

（2）不同种类来源的抗血清(如兔与羊)在等效价的情况下进行试验结果会有差异。apoA-Ⅰ测定以兔抗血清为好。

（3）在一定条件下电泳不同稀释度校准血清的峰高不会有明显变动校准曲线斜率基本一致。如标本峰高超出校准曲线范围时应调整标本稀释倍数后重测。板间CV通常小于5%。

（4）火箭电泳结果可以用染色法或直接肉眼观察可见的火箭峰。

（5）火箭峰的测量可以计算面积或峰高面积是峰高乘以峰宽(峰半高处的宽度)。测量精度最好能达0.1mm。

（6）本法适用于少量标本分析。也适用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp(a)测定。

不适宜人群

无。

不良反应与风险

无。

临床意义

阳性：高脂蛋白血症Ⅰ型、高脂蛋白血症Ⅴ型。

可能疾病：高脂蛋白血症Ⅰ型高脂蛋白血症Ⅴ型

检查过程

1、免疫透射比浊法：

（1）标本应是及时分离的空腹血清可密封存放在2～6℃冰箱中1周内测定-20℃可存放半年。

（2）用全自动分析仪时应根据不同仪器设计参数合理选择抗原抗体比例及反应时间。也可作速率法散射比浊测定CM如用Beckman比浊仪ICS或protein array system)。

（3）手工法所用仪器：精密光度计具有340nm滤光片(或分光器)样品池体积以0.5ml为宜(为节省抗血清)最好用流动杯样品稀释最好用稀释器、经校正的加样器。

（4）标本处理：将血清标本及质控血清各用样品稀释剂作1∶200稀释即先作1∶20稀释(5.Oμl血清+95μl稀释剂)后再作1∶10稀释(多余的1∶20血清作测定apoB用)。混匀后25～37℃放置30min在波长340nm比浊根据U-UB的A值在标准曲线上读出结果。本法批间CV<5%。

（5）校准曲线：在手工与半自动操作中每批测定均需作校准曲线可将校准血清稀释成1∶100、1∶200、1∶300和1∶400等4种浓度与标本同样操作根据定值计算出每个标准管CM浓度以浓度(X)与其相应的A值(Y)作图(用直线回归计算)基本上成直线但在Y轴上有一定截距所以不能用单点标准。操作准确时浓度与A值的相关系数应在0.985以上。如有高、中、低浓度的三份校准血清时可与标本同样操作做三点定标也可作五点定标(即高、中浓度的血清等量混合及中、低浓度的血清等量混合成为另两份校准血清)。本法线性范围：0.4～2.5g/L。

2、火箭电泳法：

（1）浇板：每板用10g/L琼脂糖10ml沸水浴中融化混匀冷至50～55℃时加入CM抗血清50μlapoB抗血清8μl(用量视抗血清效价而定)迅速混匀后倒在预置在水平台上的玻璃板上冷后放在4℃20min后打孔孔在板的阴极端孔径3mm孔间距至少5mm孔容量5μl。把板放入电泳槽用滤纸搭桥。

（2）稀释抗原：用0.15mol/L NaCl液将校准血清稀释成1∶1001∶1501∶2001∶300及1∶400(作校准曲线之用)血清标本按1∶200稀释放4℃冰箱不得超过3天。

（3）加样：在低电流状态(10mA/板)将稀释好的定值血清及标本分别吸取5μl(准确)加入琼脂糖凝胶加样孔内。每板都要做一系列标准。

（4）通电：稳流24mA/板端电压6～8V/cm以流水冷却使琼脂糖保持15℃电泳3～4h。

（5）脱杂蛋白及制干胶膜：电泳后的琼脂糖板浸泡在0.15mol/L NaCl中30min将胶膜托置于聚酯薄膜上用多层滤纸在轻轻加压下吸干胶内水分然后将滤纸、胶膜与聚酯膜三者一起自然干燥或用热吹风器吹干干后胶膜会自然与滤纸及聚酯膜分开。

（6）染色：将琼脂糖胶膜平铺浸泡于染色液内20～30min。

（7）脱色：用脱色液浸泡已染色的胶膜至火箭峰清晰背景基本无色。可在水中用两片玻璃纸将胶膜夹住晾干后可长期保存。也可以用流水浸泡脱色至背景干净。

乳糜微粒

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