1、增菌 称取检样25g加入装有225mL碱性蛋白胨水(APW)的广口瓶内。固体样品应以均质器9000r/min~10000r/min打碎或以剪刀充分剪碎。(36±1)℃培养6h~8h和16h~24h。 如为牡蛎样品应同样制备另一份检样置于APW中42℃培养6h~8h和16h~24h。
2、分离 以3mm~5mm接种环取6h~8h和16h~24h增菌培养液的表面生长物一环分别划线家终于TCBS琼脂平板至少各一个于(36±1)℃培养18~24h。 在TCBS琼脂上典型的霍乱弧菌菌落为大的光滑黄色稍平具有不透明中心和半透明的边缘。
3、初步鉴定
(1) 用接种环挑取TCBS琼脂平板上2~5个可疑菌落划线于T1N1琼脂平板上(36±1)℃培养12h~18h。
(2) 以无菌白色滤纸沾取T1N1琼脂表面培养物滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。
(3) 以无菌环取氧化酶阳性的培养物于0.5%去氧胆酸钠液试剂滴中进行粘丝试验。
(4) 以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物接种TSI、KIA和AGS穿刺底层并划线斜面。
(5) 以接种针取上项相同培养物接种T1N0和T1N3肉汤。
(6) 将TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉汤于(36±1)℃培养18h~24h。