NGS(next-generationsequencing，NGS)技术

在20世纪70年代，Sanger等分别开发了通过链终止和片段化技术对DNA进行测序的方法，这些方法提供了破译完整基因以及整个基因组的工具，从而改变了生物学。Sanger等开发的第一代测序技术(Sanger测序)测序准确性高、读长较长，在人类基因组计划及其他领域取得重大成就，Sanger技术实现了2004年第一个人类基因组序列的完成。随着科学技术的发展，第一代测序技术已不能满足目前全基因组测序的需求，因此出现了现在的新一代基因测序方法，即NGS技术，又称大规模平行测序或深度测序，包括第二代、第三代和第四代测序技术。目前，具有代表性的第二代测序平台有基因组测序仪、HiSeq2000和MiSeq、寡聚物连接检测测序(sequencingbyoligoligationdetection，SOLID)5500XL、个人化操作基因组测序仪；第三代测序平台有HeliScope遗传分析系统和单分子实时测序技术；第四代测序技术有纳米孔测序技术。代表性的第二代测序平台主要技术核心原理是桥式PCR和荧光可逆终止子的边合成边测序，先构建待测单链DNA文库，形成寡核苷酸桥，进行PCR扩增、变性，切掉dNTP3′端延长终止基团，继续添加碱基进行测序；SOLID测序技术是基于连接酶法，即利用DNA连接酶在连接过程中测序，单链DNA文库构建、微乳液PCR扩增以及连接酶测序；纳米孔测序技术为单分子测序，有高通量的GridION和U盘大小MinION测序仪。因DNA分子在电泳驱动下通过纳米微孔组成电路时可引起特征性电流变化，据此可确定DNA分子的碱基类型和排列顺序。其有生物纳米孔和固态纳米孔，后者较前者稳定性更好。现今NGS取得了令人瞩目的进展，正在发展成为分子显微镜，几乎涉及生物医学研究的每个领域。